人血清鐵蛋白（SF）ELISA試劑盒實驗前樣本的處理方法在收集樣本前都必須有一個完整的計劃，必須清楚要檢測的成份是否足夠穩(wěn)定。對收集后當(dāng)天就進(jìn)行檢測的樣本，及時儲存在4℃?zhèn)溆谩τ诟籼煸贆z測的樣本，及時分裝后凍存在-20℃?zhèn)溆茫袟l件的，最好-70℃凍存?zhèn)溆谩?biāo)本應(yīng)避免反復(fù)凍融。
液體類標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清等。
1.血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘后、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成、應(yīng)再次離心。
2.血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑、混合10-20分鐘后、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
3.尿液:用無菌管收集、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成、應(yīng)再次離心、胸腹水、腦脊液參照此實行。
4.細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時、用無菌管收集、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清。
5.培養(yǎng)細(xì)胞:檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時、用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液、細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右、通過反復(fù)凍融或加入組織蛋白萃取試劑、以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、保存過程中如有沉淀形成，應(yīng)再次離心。
6.組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后、稱取重量、加入一定量的PBS、PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?/span>、標(biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度、加入一定量的PBS(PH7.4)、或組織蛋白萃取試劑、用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿化、離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)、仔細(xì)收集上清、分裝后一份待檢測、其余冷凍備用。
人血清鐵蛋白試劑盒操作：
人血清鐵蛋白試劑盒使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
標(biāo)本用標(biāo)本稀釋液1：1稀釋后加入50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。加入稀釋好后的標(biāo)準(zhǔn)品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標(biāo)記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育1小時。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入80ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作3次。如果用洗板機(jī)洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育10分鐘。避免光照。取出酶標(biāo)板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。在450nm波長處測定各孔的OD值。局限6號標(biāo)準(zhǔn)品以上的結(jié)果為非線性的，根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線無法得到精確的結(jié)果。
人血清鐵蛋白試劑盒性能：
1、靈敏度：最小的檢測濃度小于1號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為1.0 ng/mL。
2、特異性：不與其它細(xì)胞因子反應(yīng)。
3、重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
文章關(guān)鍵詞：人血清鐵蛋白（SF）ELISA試劑盒,試劑盒操作方法,操作注意事項
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